home *** CD-ROM | disk | FTP | other *** search
/ The Arsenal Files 6 / The Arsenal Files 6 (Arsenal Computer).ISO / health / med9603.zip / M9630661.TXT < prev    next >
Text File  |  1996-02-27  |  3KB  |  49 lines
  1.        Document 0661
  2.  DOCN  M9630661
  3.  TI    CDR walking mutagenesis for the affinity maturation of a potent human
  4.        anti-HIV-1 antibody into the picomolar range.
  5.  DT    9603
  6.  AU    Yang WP; Green K; Pinz-Sweeney S; Briones AT; Burton DR; Barbas CF 3rd;
  7.        Department of Molecular Biology, Scripps Research Institute, La; Jolla,
  8.        CA 92037, USA.
  9.  SO    J Mol Biol. 1995 Dec 1;254(3):392-403. Unique Identifier : AIDSLINE
  10.        MED/96095799
  11.  AB    We describe the investigation of methodologies for the creation of very
  12.        high affinity human antibodies. The high affinity human antibody b4/12
  13.        was optimized for its affinity to the human envelope glycoprotein gp120
  14.        of human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1). Five libraries of b4/12
  15.        were constructed by saturation mutagenesis of
  16.        complementarity-determining regions (CDRs). Libraries of antibody Fab
  17.        fragments were displayed on the surface of filamentous phage and
  18.        selected in vitro for binding to immobilized gp120. Sequential and
  19.        parallel optimization strategies of CDRs were examined. The sequential
  20.        CDR walking strategy consistently yielded b4/12 variants of improved
  21.        affinity in each of the four different optimization sequences examined.
  22.        This resulted in a 96-fold improvement in affinity. Additivity effects
  23.        in the antibody combining site were explored by combining independently
  24.        optimized CDRs in the parallel optimization strategy. Six variants
  25.        containing optimized CDRs were constructed. Improvement of affinity
  26.        based on additivity effects proved to be unpredictable but did lead to a
  27.        modest improvement in affinity. Indeed, only one of the six combinations
  28.        demonstrated additivity. The highest affinity Fab prepared using this
  29.        strategy was improved 420-fold in affinity. The affinity of this Fab was
  30.        15 pM as compared to 6.3 nM for b4/12. Examination of the kinetics of
  31.        Fab binding to gp120 revealed that improvements in affinity were
  32.        dominated by a slowing of the off-rate of the Fab. The methodology
  33.        presented here provides a route for the improvement of the affinities of
  34.        antibodies typical of tertiary immune responses into the picomolar
  35.        range. Such improvements may have profound effects on the utility of
  36.        antibodies as therapeutic and prophylactic agents.
  37.  DE    Amino Acid Sequence  Antibody Affinity/*GENETICS  Antigen-Antibody
  38.        Reactions  Bacteriophages/GENETICS  Base Sequence  Binding Sites,
  39.        Antibody/*GENETICS  Comparative Study  Gene Library  HIV
  40.        Antibodies/*GENETICS/IMMUNOLOGY  HIV Envelope Protein gp120/*IMMUNOLOGY
  41.        HIV-1/*IMMUNOLOGY  Immunoglobulins, Fab/GENETICS  Immunoglobulins,
  42.        Heavy-Chain/GENETICS  Immunoglobulins, Light-Chain/GENETICS  Models,
  43.        Molecular  Molecular Sequence Data  *Mutagenesis  Support, Non-U.S.
  44.        Gov't  Support, U.S. Gov't, P.H.S.  JOURNAL ARTICLE
  45.  
  46.        SOURCE: National Library of Medicine.  NOTICE: This material may be
  47.        protected by Copyright Law (Title 17, U.S.Code).
  48.  
  49.